Hur man förbereder agarplattor

Molekylärbiologi och bakteriologi användning agarplattor till kultur mikroorganismer såsom bakterier för experimenterande . Ägarn är agenten som stelnar , eller geler , en flytande näringsmedium erfordras av mikroorganismen för att överleva och växa. När överförs till en agarplatta , bakterierna växa till olika kolonier ( om odlas i låga koncentrationer ) eller fläckar ( om odlas i höga koncentrationer ) och kan skördas för analys . Biologer förbereda agarplattor , eftersom processen kräver tillgång till laboratorie -grade reagenser och maskiner samt en god förståelse för molekylärbiologi och sterila tekniker . Detta är vad du behöver
Handskar
Laboratorierock
Ansiktsmask
bunsenbrännare
laminärt flöde huva
Sterila petriskålar
10g baktotrypton
5g jästextrakt
15g agaros
1 ml 1 N NaOH
Sterilt destillerat vatten
Glasflaska
Autoklav band
Autoklav
Kosttillskott , t.ex. antibiotika såsom ampicillin
Visa fler Instruktioner
1

Sätt på korrekt skyddsutrustning, inklusive handskar , skyddsrock och en ansiktsmask , och sanera alla ytor . Arbete bredvid en Bunsen-brännare , eller företrädesvis i en steril huv med laminärt flöde . Detta förhindrar att luftburna föroreningar från att falla in i agar .
2

Ta bort bunten med petriskålar från förpackningen men spara för ompackning av agarplattor . Märk den yttre ytan av skålen ( inte locket ) med den typ av agar och datum för beredning. Lägg plattorna ut som ett enda lager med locken borttagna för att hälla av agar lättare. Addera 3

Blanda baktotrypton , jästextrakt och agaros tillsammans och sedan lägga till natriumhydroxid (NaOH )-lösning. Lägg till sterilt destillerat vatten för att få 1 liter näringsmedier . Överför lösningen till en glasflaska med minst 1.5L volym. Skruva löst på locket på flaskan och ange datum för förberedelse och namnet på medierna . Placera en remsa av autoklav tejp på flaskan och autoklavera den under 25 minuter. Låt flaskan svalna till lägst 45 grader Celsius ( eller det kommer att hårdna för tidigt ) , men inte högre än 50 grader Celsius . Du kan lagra flaskor med kylt och stelnat agar vid 4 grader Celsius och sedan varm tills flytande . Om det behövs för just ditt experiment eller stam av bakterier , tillsätt lämplig typ och mängd av tillägg som antibiotika . Om materialet är för varmt , kommer tilläggen att förstöras , så noggrant kontrollera temperaturen i media innan du fortsätter .
4

Häll en tillräcklig volym av agar till halv fylla skålen medan agar är fortfarande varm och flytande . Se till att den yta är helt täckt. Häll inte en överdriven mängd eller låta ägarn når toppen av skålen. Håll plattorna i en steril atmosfär , genom att låta den Bunsenbrännare eller huv med laminärt flöde för att köras kontinuerligt . Låt plattorna för att ställa in och sedan tillbaka locken .
5

Torka agarplattor i ca 30 minuter till en timme i en ugn inställd högre än 37 grader Celsius . Alternativt kan du lämna dem i laminärt flöde huva i tre minuter eller på ett sanerat laboratoriebänk i en låg - trafik område som inte är dragigt för en dag eller två . Torkning plattorna stannar någon bakterielösningplaceras på agarytan från att bara späda ut och glider av , i stället för att bilda kolonier som fastnar på agar .
6

förvaras försiktigt plattorna i mörker och vid 4 grader Celsius . Stapla torkade agarplattor med sina bottnar upp till att du kan tydligt se etiketterna och att förhindra mikroorganismer och skräp från att falla ut på agar ytan och förorena dem . Sätt skålarna tillbaka i sin förpackning , täck med aluminiumfolie och tejpa förpackningen stängd. Märk packade plattorna med innehåll och datum för beredning. Du kan lagra plattorna i upp till två månader , och ska kasta dem efter det. Addera