Viss laboratorieutrustning och varor är nödvändiga för att underlätta processen för retroviral infektion . Utrustning ingår 1 pipett stöd , 1 pipett - man , 1 vävnadsodling huva , 37 - grader Celsius och 32 grader Celsius inkubatorer , samt en Eppendorf centrifug . Varor omfattar vävnadsodlingsplattor, en disponibel Pasteur pipett , kvalificerad retroviral supernatant , filtersteriliserad polybren och filtersteriliserad protaminsulfat .
Förbereda Cell för infektion
Prior till infektion , måste målceller delas i en vävnadsodlingsplattaoch inkuberas över natten i en 37 - graders Celsius inkubator med fem procent CO2 . Syftet av inkubationsperioden är att skapa celler som är 50 % konfluenta . Förberedelse cellerna i förväg är nödvändigt att säkerställa att cellerna är optimerade för infektionsprocessen . Den Nolan Lab vid Stanford University rekommenderar att cellinfektionbörjar alltid börja med att infektera NIH 3T3-celler för att optimera resultatet av testet . Addera infektera celler
< p > Efter inkubationstiden är över , bör forskarna se till att cellerna är både friska och i rätt sammanflödet . Med hjälp av vävnadsodling huva , är cellulär materia aspireras och en viral supematant appliceras till cellerna. Efter applicering bör plattan vara försiktigt vaggas fram och tillbaka för att säkerställa att den är jämnt fördelad. Celler bör då vara spinn ympades genom att placera dem i en Eppendorf -centrifug och spinning dem vid 2500 rpm under nittio minuter vid en temperatur på 30 grader Celsius. Efteråt bör cellerna inkuberas vid 32 grader Celsius under en till två dagar. Viruset ersätts sedan med de extraherade cellerna och placeras i inkubator som skall analyseras som helst från tre till sju dagar efter den första infektionen . Addera
Upphovsrätt © Hälsa och Sjukdom