Kloramfenikol Plate Förberedelser

Kloramfenikol är ett bredspektrumantibiotikum som dödar bakterier mikrober genom att störa deras förmåga att replikera . Denna antibiotika utvecklades ursprungligen för att bekämpa infektioner hos människor , men enligt Drug.com , den används endast nu , som i denna publikation , som en sista utväg när andra läkemedel inte fungerar på grund av allvarliga biverkningar såsom aplastisk anemi , hypoplastisk anemi , trombocytopeni och granulocytopeni . Kloramfenikol är användbar i ett forskningslaboratorium för molekylärbiologiska experiment. När kloramfenikol är beredd på en tallrik , kan den användas för att påvisa bakteriell koncentration eller att isolera specifika stammar av bakterier för ytterligare experiment . Detta är vad du behöver
Destillerat vatten
kloramfenikol
1,0 procent tryptone
0,5 procent jästextrakt
1,0 procent natriumklorid ( NaCl ) pH 7,0
95 procent etanol
Agar
2 - liters kolv
magnetomrörarplatta
medelstora magnetisk omrörare
latex eller nitrilhandskar
Laboratorie skala
Autoklav
30 sterila 10 cm plattor
Blå märkpenna
Parafilm
Aluminiumfolie
Autoklav tejp
Visa fler Instruktioner
1

Sätt på dig ett par av latex eller nitrilhandskar att förbereda LB buljong . LB-buljong är en vanlig förkortning för Lysogeny buljong eller Luria-buljong , och det är som används som tillväxtmedia för odling av bakterier. Det kan göras från grunden i laboratoriet , eller för att spara tid kan köpas från någon molekylärbiologi lager leverantör .
2

Placera ett ark av vägningspapperpå skalan . Tryck på nollställningsknappenpå skalan så att vikten av papperet som inte ingår i den slutliga vikten . Lägg små mängder trypton i taget , tills du når 10 g. . Vik sedan väger papper på mitten med trypton i centrum . Plocka upp den väger papper och försiktigt använda vikta papper som en tratt för att lägga till trypton till 2 L kolv . Följ denna procedur för att väga 5 g jästextrakt , 10 g NaCl och 15 g agar . Addera 3

Släpp omrörare i kolven och centrera kolven på den magnetiska omrörningsplatta . Lägg tillräckligt med destillerat vatten så att lösningen till 1 liter .
4

Vrid uppståndelse plattan på , och titta på omrörare. Plattan bör sättas i rätt hastighet så att omröraren att flytta i måttlig takt utan att fastna på sidorna av kolven. Justera inställningarna vid behov. Låt lösningen sitta på plattan tills alla reagensen har upplösts.
5

Stäng av omrörningsplatta och sträcka en 3 -tums fyrkantig bit parafilm över toppen av kolven , för att täcka och skydda kolven från eventuella föroreningar eller spills . Täck sedan parafilm med en bit aluminiumfolie och lägga till en bit av märkning autoklav tejp ovanpå folien.
6

Placera lösningen i en autoklav på vätskecykelunder 20 minuter vid 15 psi till sterilisera den.
7

Ta kolven ur autoklaven . Det kommer att bli mycket het . Låt lösningen svalna till ca 55 grader celsius , genom att låta det sitta i rumstemperatur , eller genom att placera kolven i ett 65 - grader vattenbad .
8

Spraya och torka av arbetet yta med 95 procent etanol för att förhindra förorening . Det är också en bra idé att ändra dina handskar innan du hanterar plåtarna .
9

Markera sidan och lock av varje platta med vertikal blå band med hjälp av märkpenna . Detta tyder på plattorna innehåller LB buljong och kloramfenikol .
10

Lägg tillräckligt med kloramfenikol antibiotika till lösningen så att koncentrationen uppnår önskad mängd , beroende på vilka bakterier som du kommer att arbeta med . Ett vanligt slutkoncentration är 100ug/ml . För denna koncentration , lägga till 1 ml kloramfenikol lager ( vid 25mg/ml ) . Snurra flaskan i en cirkulär rörelse , eller sätt tillbaka på magneten rör plattan i 1 till 2 minuter för att se till att det är väl blandat.
11

Torka munnen på kolven med etanol , och häll sedan lösningen i plåtarna , tills de är fylld till hälften med lösningen. Låt plattorna hårdnar , täcker varje platta med lock och förvara dem upp och ner vid 4 grader Celsius för att förhindra dem från uttorkning . Addera