Cell Frysning Protocol

Bevara celler genom frysning är viktigt för forskning, veterinärmedicin och djuruppfödning eftersom det tillåter celler som skall lagras under lång tid. Frysning valda metoden måste dock minska eller förhindra skador på cellen. Den kryokonservering medel och metod kan bero på celltypen. Förberedelser

Celler bör frysas när de är friska och aktivt växande med en 90 procent livskraft. Försiktighet bör iakttas om hantering och höghastighetscentrifugering och kraftig pipettering eller suga bör undvikas för att bibehålla lönsamheten och förebygga cellskador. Är
kryoskydd

kryoskydd agent användas som en ersättning för intracellulär vatten. Agenten hindrar iskristaller och uttorkning uppstår i cellerna. Steriliserad glycerol och steriliserad dimetylsulfoxid används ofta vid en koncentration av 5 procent till 15 procent (volym per volym) utspätt i antingen fosterkalvserum eller media tillväxt, beroende på celltyp.
Frysning och lagring

Celler i frysblandningen bör kylas långsamt. Om en programmerbar frys är inte tillgänglig, kan cryovials vara insvept i silkespapper eller placeras i frigolit, vilket kan bromsa frysningen. Celler bör hållas vid minus 80 grader Celsius under 24 timmar och överfördes sedan till flytande kväve för långtidslagring.
Upptining

frusna cellerna ska tinas snabbt. Ett vattenbad vid 37 grader Celsius kan användas. Försiktighet bör iakttas med celler som lagras i flytande kväve kan emellertid såsom flytande kväve in i flaskorna och kan explodera vid upptining. Frysblandningen bör spädas i odlingsmedier. Cellviabilitet bör bedömas med färgämnet trypanblått och celler som odlas som vanligt.