Den TMRE protokoll

Tetramethylrhodamine etyl-(TMRE) är en "långsam, lipofila, katjoniska fluorescerande reditribution färgämne" som används i MitoPT ™ TMRE /TMRM mitokondriell membranpotential Assessment Kit, tillverkad av immunokemi Technologies, LLC. Processen hjälper till att visa en transmembranös elektrisk potential gradient i cellerna. Förbereda Assay

Protokollet är enkla att följa, och tar cirka 20 minuter att bearbeta vid 37 grader Celsius. De levande celler som används i analysen kan ta mellan flera timmar och flera dagar för att förbereda för användning. De styrceller kan ta flera timmar att förbereda, eftersom de måste förmås att genomgå apoptos.
Protocol Del 1

Kultur celler till en täthet optimal för apoptos eller oxidativ stress induktion, enligt dina specifika induktion protokoll, men inte överstiga 10 (6) celler /ml.
Protocol Del 2

Samtidigt tid, kultur en icke-inducerad negativ kontroll cellpopulation (vid samma densitet som den inducerade populationen. Addera Protocol Del 3

inducera apoptos eller avsiktligt depolarisera mitokondrierna följande önskad protokoll. Addera Protocol Del 4

Bered 1x Assay /Wash Buffer.
Protocol Parts 5 till 8

Förbered 1 mM eller 0,2 mM MitoPT ™ TMRE /TMRM lager. För Protocol Del 6, förbereda en 1:100 spädning av 1 mM, eller en 1:20 spädning av 0,2 mM MitoPT ™ TMRE /TMRM lösning för tillsatta i proven cellkultur.

För Protocol Del 7, fläck celler med hjälp av en slutlig 20-200 nM koncentration av MitoPT ™ TMRE /TMRM lösning.

För Protocol Del 8, analysera uppgifter. Addera