Hur man gör en begränsning Karta

I början av molekylärbiologi, använde forskarna ofta restriktionskartering att förstå de gener de studerade. I moderna forskningslaboratorier, är restriktionsmappning omoderna eftersom sekvensering har blivit mer tillgänglig och mer ekonomisk än tidigare. Det finns dock fall där en begränsning karta kan vara tillräckligt för en forskare att utföra sina undersökningar. Den övergripande strategin för restriktionsmappning innebär användning av matsmältningsenzymer att bryta ner fysiskt ett prov av DNA. När du mäta produkter från denna matsmältningen, kan du "sätta ihop" bitarna och härleda den ursprungliga sekvensen av DNA. Saker du behöver
Restriktionsenzymer
Sample DNA
buffertlösning
Is och varmt vattenbad
Gelelektrofores utrustning
Visa fler instruktioner kommenterar: Dna Digestion

1

Lägg ett restriktionsenzym till din DNA-prov. Använd EcoR1, ett vanligt enzym, till exempel.
2

Lägg denna blandning till en buffertlösning, som huvudsakligen är en plats för att reaktionen ska ske.
3

Höj temperaturen på reaktionen, såsom anges i den New England BioLabs manual. Varje restriktionsenzym har en specifik reaktionstemperatur vid vilken den fungerar bäst. Dessutom har varje enzym en specifik nukleotidsekvens den är utformad för att rikta. EcoRI kommer att skanna och skär DNA vid nukleotidsekvensen CAATTC. Denna exakta ordningen av nukleotider måste existera för enzymet att binda och klippa DNA. Fram till denna punkt, skall allt material förvaras på is för att förhindra oönskad aktivitet. Efter att reaktionen ska ske enligt vad som anges i manualen
4

, kör blandningen i en gelelektrofores maskin för att separera DNA fragment baserat på storlek. De minsta fragmenten kommer att flytta den längst över gelén.
5

Mät den sträcka som varje DNA-fragment. Dessa fem steg bör upprepas med flera olika enzymer separat. Konstruera Restriction Map
6

Använda uppgifter från gelén
, samla in all information du har hittat med hjälp av olika restriktionsenzymer.
7

Härled ordningen på restriktionsställen genom att jämföra de olika fragmentlängder som produceras av varje enzym. Till exempel, om enzym # 1 producerade två fragment av samma längd och enzym # 2 producerade tre fragment av samma längd, kan du dra slutsatsen att enzymet nr 1 snitt halvvägs genom DNA och enzymet # 2 skär DNA i tredjedelar.

8

Använda slutsatserna i steg 2, montera ordning restriktionsställen för DNA.