MBP reningsprotokoll

MBP eller maltosbindningsprotein finns i bakterier Escherichia coli, som är en del av tarmfloran hos människor och djur. Reningen av MBP involverar en rad förfaranden som syftar till att separera proteinets beståndsdelar. I molekylärbiologi, är MBP rening en viktig process för studiet av struktur och funktion av detta protein. MBP reningsprotokoll inkluderar MBP smält proteiner rening, småskalig MBP-fusion och maltosbindningsprotein fusion tag rening. MBP Brända Proteiner Rening

Under denna protokoll, tekniker tvätta 20 ml av polymeren amylosharts med atris lösning vid pH 7,4, natriumklorid, merkaptoetanol (ME) och etylendiamintetraättiksyra (EDTA), i enlighet med protokollen Online. Cellprover tillsätts, centrifugerades och analyserades på gelelektrofores. Proverna analyseras också i ett chromatographer, där tekniker eluat eller observera lösningens beståndsdelar samtidigt som passerar genom kromatografikolonnen.
Småskalig MBP-fusion Proteinrening

Enligt Hebreiska universitetet i Jerusalem, biologer använder reagens isopropyl BD-1-tiogalaktopyranosid (IPTG), kultur spin cell i 10 min vid 8000 varv per minut vid 39,2 grader Fahrenheit. Senare, ta bort de överstående vätskan och blanda kall PBS buffert till provet, som är uppdelad i flera rör och centrifugeras igen. Proverna hålls sedan vid -112 grader Fahrenheit för bakre analys. Är genetiskt manipulerade molekyler används i molekylärbiologi
maltosbindningsprotein Fusion Tag Rening

affinitetsmarkörer att detektera och rena proteiner. Detta protokoll är en komplex uppsättning förfaranden uppdelad i tre etapper, som omfattar byggandet av polyhistidin protein markör (HisMBP), ett pilotprojekt för att utvärdera lösligheten av proteinet, och storskalig rening av MBP molekyler, enligt Nature protokoll . Bortsett från E. coli-prover, tekniker använda ampicillin, kanamycin, IPTG, anhydrotetracyklin, glukosmonohydrat, cell-lys-buffert, DNA-polymeras, PCR-primrar, Tris-acetat-EDTA och etidiumbromid.