Paraffininbäddning protokoll

Forskare brukar behöva stelna biologiska prover till avsnitt av dem. Detta gör det lättare för forskarna att lägga färgämnen, antikroppar och sonder till det biologiska provet. Det minskar också överlagring av olika cellager. Forskare använder paraffin som en hård matris för styckning, eftersom paraffinet inte blandas med vatten. Paraffin är en typ av kolväte. De biologiska prover innehåller vatten, så forskarna måste torka proverna med hjälp av allt mer koncentrerad etanol bad. Xylen

Forskare avlägsna etanolen med xylen. Sedan använder de smält paraffin för att avlägsna xylen. För ljusmikroskop, de paraffinsektioner är oftast fem um tjock. Paraffin är inte tillräckligt hårt för tunnare skivor. Forskare rehydrera vävnaden genom användning av xylen först, sedan etanol. Sedan skölj det biologiska provet med destillerat vatten för att undvika kontaminering.
Fastställande

Paraffininbäddade vävnader vanligtvis fästs med hjälp av neutral buffrad formalin, som är den kommersiella versionen av formaldehyd. Detta inkluderar paraformaldehyd och metanol, som förhindrar att formaldehyd från konvertera till myrsyra. Tunt skivade vävnader behöver 48 timmars fixering vid rumstemperatur för optimal histologi, som är studiet av mikroskopisk anatomi. Annars vävnaden kommer att hårdna och bli spröda. Före bearbetningen skall vävnaden oftast lagras i 70 procent etanol vid en temperatur på 4 grader Celsius.
Paraffin Processorer

Forskare använder ofta paraffin-processorer för att skicka den hjärnvävnad bad som gradvis dehydratisera materialet innan varm paraffin kan gå in genom vävnaderna. Forskare kör processorn natten. Processorn värmer endast vävnaden under en viss tid beroende på vävnaden för att göra det inte blir hårt och sprött. Processorn använder ett vakuum som påskyndar permeation av paraffin och tar bort luftbubblor. När behandlas, vävnaderna förvaras i kassetter vid rumstemperatur. Paraffinet smälter under en timme före tillsats av vävnaden
Wax Melting

. Hela kassetten placeras i en 65 grad Celsius paraffin vattenbad i 15 minuter. En kall aluminium kylfläns kyler paraffinvax i 20 minuter. När vaxet sprickor eller vävnader inte hamnar rätt, smälter vetenskapsmannen paraffinet och upprepar processen.
Cutting

När sektionering vävnaderna, får vetenskapsmannen på vattenbadet på 35 till 37 grader Celsius. Vattnet är friskt och avjoniserat. Blocken placeras med framsidan nedåt på ett isblock eller kylfläns för 10 minuter. En kniv skär blocket i sektioner. Två problem som kan uppstå är fattiga ribboning och fragmentering prover. När exemplar fragmentet, är vattnet för varmt. Huruvida blocket inte bandet väl, bör du sätta tillbaka det på isblock och företaget upp vaxet innan igen.