Perfusion Teknik

Perfusionen tekniken ger snabb och jämn fixering till alla enskilda celler i vävnaden. A 4 procent paraformaldehyd fixativ förs via kärlsystemet att erhålla vävnad av intresse. Det huvudsakliga målställe för läkemedelsadministrering i ett speciellt organ kan identifieras med hjälp av denna teknik. Perfusion har också hjälpt forskare att förstå den strukturella och funktionella organisation av den mänskliga hjärnan. Saker du behöver
Animal (råtta eller apa) katalog Perfusion pump, bägare
Fixative (4 procent paraformaldehyd) katalog Kanyler
Perfusion droppa som
Sax
Skalpell
Tång
0,9 procent saltlösning
Islåda
Visa fler instruktioner
1

Bered en färsk 4 procent paraformaldehyd genom att blanda 40 g paraformaldehyd i 800 ml vatten. Värm upp lösningen till 60 C under omröring. Kyl lösningen till 4 C. Justera pH till 9,5 med hjälp av en pH-mätare. För justering av pH, tillsätt isättika för att erhålla det önskade pH
2

Ställ in perfusionen pumpen,. Bifoga alla glasdetaljer och en perfusion nål. Springa 100 ml kranvatten genom slangen av perfusionen pumpen för att avlägsna eventuella rester från glasdelar. Placera en bägare av fixativ i ett frysfack.
3

Öppna slutet av perfusionen röret och placera det i en fixativ bägare. Skala volym lösning i enlighet med storleken av djuret. Nu justerar ventilen perfusion pumpen till en långsam, stadig dropp. Stäng ventilen. Fyll perfusionsapparaten med 0,9 procent (vikt /volym) saltlösning.
4

Ställ in operationsinstrument nära operationsbordet. Ge en anestesi injektion till djuret enligt dess kroppsvikt (ketamin 0,5 mg /kg). Placera djuret på operationsbordet med ryggen nedåt.
5

Gör ett snitt med en skalpell, längs membranet. Med den stora saxar, trubbig nedåt skär den bindväv vid botten av membranet. Exponera hjärtat. Håll bultande hjärta med pincett och sätt en nål i vänster kammare.
6

Öppna ventilen av perfusionen pumpen att tillåta flödet av 0,9 procent saltlösning. Kontrollera att lösningen flödar fritt och djuret lever. Hjärtat av djuret bör vara fortlöpande slå. När blodet ersätts med saltlösning, ändrar lösningen till 4 procent paraformaldehyd.
7

Stoppa perfusion och dissekera en vävnad av intresse. Håll vävnad i samma medium vid 4 C. Addera ditt