Protokoll för Hoechst färgning

Hoechst fläckar är fluorescerande färgämnen som används för märkning DNA och RNA genom fluorescens mikroskopi och flöde tekniker cytometry. Hoechst 33258 och Hoechst 33.342 är den mest använda av dessa fläckar. De har förmågan att binda till DNA-molekyler, vilket orsakar att kärnor och mitokondrier att visas fluorescerande i ultraviolett ljus. Protokoll för Hoechst färgning är vanligt i bioteknisk och genetik laboratorier, och inkluderar tekniker cellfärgning använder både Hoechst 33258 och Hoechst 33342. Hoechst 33342 HSC färgning och Stem Cell reningsprotokoll

Detta protokoll används för att färga celler från möss benmärg. Tekniker förbereda benmärgsprov med HBSS + saltlösning, HEPES-buffert och fetalt kalvserum. De snurra lösningen och lägga till ett förvärmt DMEM-medium. Hoechst fläcken tillsätts sedan. Lösningen placeras i en 98,6 grader Fahrenheit vattenbad i exakt 90 minuter, rapporterar institutionen för immunologi vid University of Pittsburgh. DNA-segment visas fluorescerande i en flödescytometer. Addera Hoechst 33342 DNA färgning

Under detta protokoll, tekniker suspenderade Hoechst 33342 fläck i destillerat vatten, tillsätt 2 procent fetalkalvserum till cellprovet, varvid pH hålles vid 7,2 med hjälp av en buffertlösning. Cellerna inkuberas därefter vid 98,6 grader i en timme, och analyserades omedelbart med en utrustning som kallas cytometer.

Målat DNA är då synlig och fluorescerande, enligt University of Michigan Health System.


DNA upptäckt med hjälp av DNA-bindande Fluorokrom Hoechst 33258

protokoll använde en apparat som kallas spektrofotometer för att analysera DNA och RNA-segment. Tekniker använder Hoechst 33258 fungerande lösning och kalvtymus DNA-prov. De gör också en separerad lösning med hjälp av DNA-prov och en kemikalie som heter etidiumbromid. Senare De jämför resultaten cellfärgning i båda medierna, med hjälp av en spektrofotometer, enligt Current Protocols in Cytometry.