Retrovirusinfektion Protokoll

Innehållande ett RNA-genom som är inkapslad i en kapsid och lipidhölje, retrovirus innehåller polypeptidkedjor som hjälper länka dem till receptorer i membran av värdceller som de infekterar. De flesta celler 'ärftliga information kodad i DNA, som av retrovirus ingår i RNA, retrovirus bär också enzymet omvänt transkriptas, ger dem möjlighet att ansluta sig till värd-DNA. Vissa protokoll följs av laboratorier i målmedveten infektion av DNA-cell med dessa virus. Förbereda Laboratory

Viss utrustning och förbrukningsartiklar är nödvändiga för att underlätta processen för retrovirusinfektion. Utrustning som ingår 1 pipett stöd, 1 pipett-man, 1 vävnadsodling huva, 37-grader Celsius och 32 grader Celsius inkubatorer, och en Eppendorf-centrifug. Leveranser omfattar vävnadskulturplattor, en disponibel Pasteur pipett kvalificerad retrovirus supernatanten, filtersteriliserade polybren och filtersteriliserades protaminsulfat.
Förbereda Cell för infektion

Prior till infektion, måste målceller delas i en vävnad-kultur plattan och inkuberas över natten i en 37-graders Celsius inkubator med fem procent CO2. Syftet av inkubationsperioden är att skapa celler som är 50% konfluenta. Förberedelse cellerna förhand är nödvändigt att säkerställa att cellerna är optimerade för infektionsprocessen. Den Nolan Lab vid Stanford University rekommenderar att cellinfektion alltid börja start genom att infektera NIH 3T3-celler för att optimera resultatet av testet. Addera ditt infekterar celler

Efter inkubationstiden är över, bör forskarna se till att cellerna är både sunt och rätt sammanflöde. Använda vävnads-kultur huva, är cellulär materia aspirerades och en viral supernatant appliceras till cellerna. När tillämpas, bör plattan försiktigt gungade fram och tillbaka för att se till att det är jämnt fördelat. Celler bör sedan spin-inokuleras genom att placera dem i Eppendorf-centrifug och spinning dem vid 2500 rpm under nittio minuter vid en temperatur på 30 grader Celsius. Efteråt, bör cellerna inkuberas vid 32 grader Celsius under en till två dagar. Viruset ersätts sedan med de extraherade cellerna och placeras i inkubator som skall analyseras allt från tre till sju dagar efter den första infektionen.