TPA reningsprotokoll

Vävnadsplasminogenaktivator eller TPA är en typ av serinproteas, som är protein kunde förstöra blodproppar. TPA finns i de celler som invändigt täcker blodkärlen. TPA-protokoll är en del av läkemedels-och medicinsk forskning om stroke, samt hjärt-och lungsjukdomar, t.ex. lungemboli och hjärtinfarkt. TPA rening hänför sig till isolering av detta protein från andra molekyler genom en serie processer, inklusive kromatografi och elektrofores. Rening av TPA från Hog ​​Njure

Detta protokoll används i studier av fibrinolys, processen för att bryta den produkt av koagulering kallas fibrin, relaterad till bildandet av tumörer. Tekniker extrahera TPA ur aceton-torkad hog njure med kaliumacetat-buffert, vid pH 4,2. Sedan lägger de ammoniumsulfat att inducera cell nederbörd. De lägger n-butyl-Sepharose till de prover som sedan analyseras på ett chromatographer. Concanavalin A tillsätts också och chromatograph.y att separera olika proteiner utförs.
Rening av TPA från kinesisk hamster och E. coli

Proteinrenhet är en viktig faktor i framgången för biologiska experiment. Renat TPA är också kommersiellt tillgänglig, vilket sparar tid och undviker risken att äventyra experimentet på grund av dåligt renat lösning. Detta protokoll involverar reningsprocesser av TPA i däggdjur och bakterieceller. Tekniker fälla cellprover, filtrat dem och utför affinitet och gelkromatografi analys. Senare, analysera de och jämföra resultaten, innan kommersiell produktion.
Expression av aktiv human TPA i E. coli
klarade lysat

cell läggs till en lysin - Sepharose-kolonn, analyseras i en chromatographer och tvättades med en lösning av natrium-klor. Ett annat prov laddas på en andra kromatografikolonn innehållande proteiner som binder till TPA med en mycket hög affinitet. Ett prov från den andra kolumnen blandas med en lösning av zink-sepharos. Det resulterande proteinet visar mer än 90 procent renhet, enligt tidskriften "Applied and Environmental Microbiology." Addera