Vad är Gelelektrofores?

Gelelektrofores är en metod för att separera, identifiera och karakterisera blandningar av proteiner eller nukleinsyror. Denaturerade prover migrerar efter applicering av el i en tunn, våt gel oftast gjorda av polyakrylamid eller agaros. De separerade proverna färgas så att de kan ses. Gelelektrofores används i protein och nukleinsyra forskning och på sjukhus för att identifiera ovanliga proteiner eller mönster DNA för att diagnostisera sjukdomar, genetiska defekter och genetiska förhållanden. Provberedning

När en detergent såsom natrium dodecylsulfonate (SDS) sättes till ett protein eller nukleinsyra, kommer detergenten associera med och fäll (denaturerad) proteiner och nukleinsyra. Denaturering av proteiner gör det lättare att bestämma deras molekylvikt i elektrofores. Mängden prov som krävs är typiskt 100 till 500 nanogram per prov band för proteiner och 5 till 100 ng per band för nukleinsyror i en total volym av ca 25 till 40 mikroliter. Addera Gels

En gel, gjord av polyakrylamid eller agaros, kan framställas eller köpas för att separera dessa proteiner. Gelen är väldigt lik gelatin. Det är mest vatten, men är tillräckligt stabilt för att hantera. Gelerna innehåller buffert för att kontrollera pH. Gelén är mycket tunna (1 till 2 mm) och rektangulära. Ena sidan ser ut som en kam med en hel del saknade tänder. Klyftorna kallas brunnar.
Provladdning

One platser gelén i en kammare med buffert och denaturerade proteiner till brunnarna. Prover av kända molekylvikter sättes till de yttre brunnarna. Geler är gjorda med varierande mängder av polyakrylamid. En låg geistyrka (4 procent) är bättre för att separera molekyler med hög molekylvikt, medan en högre geistyrka (12 procent) används för högre molekylvikt molekyler. En gradient gel varierar i geistyrka och kan separera ett brett spektrum av proteiner med förlusten av viss upplösning.
Elektromigration

Med tillämpning av en hög elektrisk spänning, de denaturerade proteinerna rör sig mot botten av brunnen. Ju högre vikt av proteinet, desto långsammare det rör sig. När elen stängs av, proteinerna slutar röra. Man tar bort gelen från kammaren och vaggar det i en skål med färgämne. Organiska färgämnen såsom Coomassie Blue eller färgämnen metall används för att färga proteiner medan fluorescerande färgämnen såsom etidiumbromid används för nukleinsyror.
Analys av Resultat

Med avlägsnande av överflödig färg, kan man se att blandningar separat i band som ser ut som stegar. Positionen för banden är jämfört med avståndet flyttas av standarder för att bestämma molekylvikten av provet i varje band. Gelén kan dehydratiseras med alkohol och torkades så att den kan sparas. Färgintensiteten av bandet sedan kan mätas för att bestämma koncentrationen av proteinet i varje band. Finns tillgängliga för att arbeta med
protokoll utveckling

Standardprotokoll väl- kända proteiner. Om en forskare arbetar med ett obekant prov, gelen styrka, buffert typ, kan pH, spänning, körtid, och fläcken måste alla optimeras för att uppnå bästa separation och signal.
Protokoll Addera