Kan du använda serum för att utföra en westernblot?

Även om det är möjligt att använda serum för att utföra en Western blot, rekommenderas det i allmänhet inte. Serum är en komplex blandning som innehåller celler och proteiner, inklusive de som kan störa upptäckten av specifika proteiner av intresse. Dessutom kan serum ha en hög bakgrundssignal, vilket kan göra det svårt att upptäcka proteiner med låg förekomst. Av dessa skäl används renade proteinprover vanligtvis i Western blots.

I vissa fall kan det dock vara nödvändigt eller fördelaktigt att använda serum för Western blotting. Till exempel, om proteinet av intresse är närvarande i låg mängd i det renade proteinprovet, kan användning av serum öka chansen att upptäcka proteinet. Dessutom kan serum användas för att studera protein-proteininteraktioner eller för att detektera antikroppar mot specifika proteiner.

Om serum måste användas för Western blotting är det viktigt att vidta åtgärder för att minimera risken för störningar och bakgrundssignaler. Dessa steg kan inkludera:

* Förbereda serumprovet genom centrifugering för att avlägsna cellrester och olösliga partiklar.

* Spädning av serumprovet för att minska koncentrationen av störande ämnen.

* Använda ett blockerande medel, såsom bovint serumalbumin (BSA), för att minimera ospecifika interaktioner.

* Optimering av Western blotting-förhållanden, såsom antikroppskoncentrationer och inkubationstider, för att minska bakgrundssignalen.

Sammantaget, även om användning av serum för Western blotting i allmänhet inte rekommenderas på grund av risken för störningar och bakgrundssignaler, kan det vara nödvändigt eller fördelaktigt i vissa fall. Noggrann optimering av Western blotting-förhållandena är avgörande när man använder serum.