Biotinylering Protocols

Biotinylering är processen att länka biotin eller vitamin H , till ett protein eller andra molekyler. Denna vetenskapliga procedur används främst inom bioteknik och molekylärbiologisk forskning som involverar DNA , proteiner och antigener , som är molekyler kroppens immunsystem att känna igen som inkräktare . Biotinylering protokoll innefattar biotinylering av antikroppar och peptider , såväl som cellytan biotinylering . Biotinylering av antikroppar

att länka biotin till antikroppar proteiner producerar när ett antigen kommer in i kroppen , tekniker använda natriumbikarbonat ( NaHC03 ) vid pH 9 , dimetylsulfoxid ( DMSO );

NHS - Biotin och salthaltig ämne som kallas PBS . Prover blandades med natriumvätekarbonat, som sedan tillsätts till NHS -biotin i DMSO. Lösningen sätts sedan till de analyserade antikroppar och inkuberades på en apparat som kallas en rotator under fyra timmar vid rumstemperatur eller över natten vid 39,2 grader Fahrenheit. Slutligen spädes lösningen med PBS. Addera Cell Surface Biotinylering

cellytan biotinylering protokollet tekniker använda vävnadsodling , fosfatbuffrad saltlösning ( PBS) vid pH 7,4 och sulfosuccinimidyl - 2 - ( biotinamido ) etyl - 1 ,3 - ditiopropionat buffertlösning för att balansera syra som innehåller aminogrupper och TrisCl , enligt Current Protocols i Protein Science, celler blandas med biotin och buffertlösningen , dekanteras och centrifuge . Solid innehåll och specifika proteiner senare analyseras på en gelelektrofores platta . Addera Biotinylering av peptider

att utföra biotinyleringen av peptider , är det reagens som används NHS - SS Biotin , enligt Philip Shepherd i " monoklonala antikroppar : . A Practical Approach " Peptider är korta fragment av aminosyror, de molekyler som bildar proteiner och DNA . I detta protokoll , är den kommersiella lösningen NHS - SS Biotin löst i vatten . Då peptiden provet tillsätts till det, tillsammans med natriumbikarbonat för att balansera surhetsgrad eller pH. Lösningen inkuberas sedan på is under två timmar. Tekniker kan observera provet med eller utan biotinmolekyler . Addera