Tissue Culture Tips

Vävnadskultur är förökning av celler i ett flytande odlingsmedium i labbet för olika vetenskapliga ändamål. Till exempel är vävnadskulturer används i diagnostik av genetiska sjukdomar , som ett medium för att odla intracellulära patogener som bakterier eller virus eller i utredningar av cellerna själva . Tissue Culture Celler

Vissa celler följer bottnarna av petriskålar eller förbli suspenderade i vätskan . Celler kan vara av vegetabiliskt eller animaliskt ursprung. Celler som används i vävnadskulturer kan vara primära celler , vilket innebär att de skördades direkt från en organism , eller av en cellinje som har hållits i kultur . Cellinjer är ofta cancerceller , och detta måste beaktas vid planering eller tolka experiment .
Behandla celler försiktigt

Adherenta celler avlägsnas från sin petriskål för passage genom skrapning eller med ett proteas , i allmänhet trypsin och EDTA. Skrapning dödar många celler och bör endast användas vid beredning cellysat ( flytande beredningar av cellinnehåll för analys ) eller när trypsin /EDTA absolut måste undvikas .

Trypsinizing avlägsnar inte bara de proteiner som fäster celler till skålen men de flesta andra proteiner på cellmembranet , för. Celler upp bollen och ta lite tid , oftast över natten , för att återupprätta en obligation med skålen . Lägga till en minimal mängd av trypsin - runt 1 ml för en 25cm2 kolv - gunga kolven under fem sekunder eller mindre till belägga monolager och sedan hälla bort eller aspirera överskottet trypsin kommer att minska mängden trypsin som monolager utsätts . Låt cellerna vila i inkubatorn under trypsinering .

Efter att cellerna glida av botten av skålen , tillsätt medier med serum och aspirera lysat upp och ner i pipett försiktigt . Tillåt lite media för att stanna kvar i skålen som du pipettera upp och ned flera gånger för att bryta sönder klumpar och få en jämn suspension.

Inte suga bubblor i pipett. Också, inte kraftigt blanda eller vortexblanda cellsuspensionen; cellerna är mycket bräckliga i detta balled upp tillståndet . Addera Till Heat inaktivera eller inte värma Inaktivera

När cellodlingsteknikvar i sin linda , fetalt bovint serum ( FBS ) var känd för att innehålla komplementproteiner, som är immunsystemet proteiner som lyserar celler . Komplementproteiner är inte önskvärda i cellkultur. Värme inactivating FBS vid 56 ° C under 30 minuter kommer att göra komplementproteiner inaktiva . Förvärmningsanordning FBS till 37 grader C också är tillräckligt för att inaktivera komplementproteiner .

I början , värmeinaktiveFBS dödade också mykoplasma och andra föroreningar . Vid den tidpunkten blev filtersterilisering utfördes med 0.45um filter. Idag , vi filtrera sterilisera FBS och media genom 0.1um eller 0.04um filter . Ingen mykoplasma kommer att slinka igenom det

Detta lämnar oss med frågan om att inte värma inaktivt

Värmeinaktiveförsämrar alla komponenter i FBS - . . Som vitaminer , aminosyror och tillväxtfaktorer - . möjligen under tröskeln för några petiga cellinjer

Om du arbetar med en långsamt växande eller petiga cellinje , anser bara filtrera sterilisera dina FBS . Du kanske tycker att detta ökar robustheten i dina celler . Addera