Competitive Binding Assay Protocol

Den konkurrerande bindningsanalys är ett experiment som bestämmer bindningskapaciteten hos proteiner eller kemikalier för specialiserade proteiner som finns på en cellyta , som kallas receptorer. Metoden används ofta i medicinsk forskning, men har också möjlighet att avgöra vilka läkemedel som binder till receptorer och modifiera receptoraktivitet , vilket i sin tur kan förändra celluppförande . Cell Preparation

återsuspendera celler i iskall fosfatbuffrad saltlösning ( PBS). Mät proteinkoncentration för att bekräfta lika proteinnivåer genom att använda en specialiserad kommersiellt tillgängligt proteinanalys . Addera Assay

Lägg en radioaktivitetsmärktprotein som är känt för att binda till receptorn, ligand, till cellen eller vävnadssuspension . Till konkurrent , som är testläkemedlet eller proteinet som studeras och inkubera med den radioaktiva liganden och cellsuspension. Bör studeras ett intervall av koncentrationer av testläkemedlet . Efter inkubation , separat bunden och obunden ligand och mäta radioaktivitet .
Dataanalys

Den vanliga åtgärden som skall bestämmas är hälften av den maximala koncentrationen som hämmar receptorn annars känd som IC50 . Detta beräknas genom att plotta koncentrationen på en logaritmisk skala på X-axeln i ett diagram medan Y-axeln representerar den procentuella hämning; en sigmoid kurva , som är en S-form , bör genereras . IC50 är 50 procent hämning punkt , och den motsvarande koncentrationen kan avläsas från diagrammet . Addera