Vidhäftande Cells Protocol

Celler i kultur är antingen en form som odlas i suspension , såsom blodceller , eller celler såsom fibroblaster som kräver en yta på vilken de kan fästa. En del av de ytor kan kräva beläggning på olika extracellulära matriser beroende på celltyp och studier. Alla cellkulturer kräver som ska utföras är aseptiska förhållanden. Optimal miljö

Majoriteten av celltyper kan odlas i Dulbeccos modifierade Eagles medium ( DMEM) eller Roswell Park Memorial Institute (RPMI ) med tillsats av 10 procent fetalt kalvserum, 2 milimoles av aminosyran glutamin och antibiotika , till exempel, 100 enheter penicillin och 0,1 milligram per milliliter streptomycin. Celler bibehålls i sina medier i en fuktad inkubator vid 37 grader Celsius och 5 procent koldioxid .
Uppdelning

Cellerna bör kontrolleras dagligen för infektion , död eller tillväxt . När vävnadsodlingskolv är 80 procent belades i celler bör cellerna delas upp för att upprätthålla cellens hälsa och log-fas av tillväxt. Media avlägsnas och cellerna tvättas i fosfatbuffrad saltlösning . Vidhäftande celler kräver tillsats av trypsin och etylendiamintetraättiksyra (EDTA ) för att avlägsna cellvidhäftningsproteiner . Måttlig omröring bör avlägsna cellerna . Media behöver tillsättas för att neutralisera trypsin /EDTA -lösning .

Subkultur

De utspädda celler och tryspin /EDTA -lösning kan centrifugeras för att pelletera och tvätta cellerna . Cellerna kan resuspenderas i media och efter utspädning och replated i nya flaskor . Varje gång cellerna dela upp celler passage numret ökas med ett.
Media Change

Media bör bytas två gånger i veckan genom att ta bort de gamla medierna och ersätta med nytt , värmde media . Addera