Vad är Gelelektrofores

? Gelelektrofores är en metod för separering , identifiering och karakterisering av blandningar av proteiner eller nukleinsyror. Denaturerade prover migrerar efter applicering av el i en tunn , våt gel oftast gjorda av polyakrylamid eller agaros . De separerade proverna färgas så att de kan ses. Gelelektrofores används i protein och nukleinsyra forskning och på sjukhus för att identifiera ovanliga proteiner eller DNA- mönster för att diagnostisera sjukdomar , genetiska defekter och genetiska förhållanden . Provberedning

När en detergent , såsom natrium dodecylsulfonate (SDS ) sättes till ett protein eller nukleinsyra, kommer detergenten associera med och veckla ( denaturerade ) proteiner och nukleinsyra. Denaturering av proteiner som gör det lättare att bestämma deras molekylvikt i elektrofores. Mängden prov som krävs är typiskt 100 till 500 nanogram per prov band för proteiner och 5 till 100 ng per band för nukleinsyror i en total volym av omkring 25 till 40 mikroliter. Addera Geler

gel , gjord av polyakrylamid eller agaros , kan förberedas eller köpas för att separera dessa proteiner . Gelen är mycket som gelatin . Det är mest vatten , men är stabil nog för hantering . Gelerna innehåller buffert för att kontrollera pH . Gelén är mycket tunna ( 1 till 2 mm ) och rektangulära. Ena sidan ser ut som en kam med en massa saknade tänder. Klyftorna kallas brunnar .
Sample Loading

One platser gelén i en kammare med buffert och denaturerade proteiner till brunnarna . Prover av kända molekylvikter tillsätts till de yttre brunnarna. Geler är gjorda med varierande mängder av polyakrylamid. En låg geistyrka ( 4 procent ) är bättre för separering av högmolekylära molekyler , medan en högre geistyrka ( 12 procent ) används för högmolekylära molekyler. En gradient gel varierar i geistyrka och kan separera ett brett spektrum av proteiner med förlusten av en del upplösning. Addera Electro

Med tillämpning av en hög elektrisk spänning, de denaturerade proteiner som rör sig mot botten av brunnen . Ju högre vikt av proteinet, desto långsammare rör sig. När elen stängs av , proteinerna stannar . Man tar bort gelen från kammaren och gungar den i en skål med färgämne . Organiska färgämnen såsom Coomassie Blue eller metall färgämnen används för att färga proteiner medan fluorescerande färgämnen såsom etidiumbromid används för nukleinsyror. Addera Resultatanalys

Med avlägsnande av överskott av färg, kan man se att blandningar separeras i band som ser ut som stegar. Placeringen av banden är jämfört med avståndet förflyttas av standarder för att bestämma molekylvikten av provet i varje band. Gelén kan dehydratiseras med alkohol och torkades så att den kan sparas. Färgintensiteten för bandet då kan mätas för att bestämma koncentrationen av proteinet i varje band .
Protokoll Development

Standardprotokoll finns för att arbeta med väl - kända proteiner . Om en forskare arbetar med ett obekant prov , kan gelen styrka , buffert typ , pH , spänning , körtid , och bets alla måste optimeras för att uppnå bästa separation och signal .
protokoll Addera