HPLC Teknik

HPLC står för högpresterande vätskekromatografi , en vanlig kvalitativ och kvantitativ analys förfarande som används i analyslaboratorier. HPLC är pålitlig och upprepbar , vilket gör det till den föredragna tekniken för att separera , identifiera och kvantifiera molekyler från komplexa blandningar av både kemiska och biologiska komponenter. Fyra komponenter

HPLC-teknik innehåller fyra huvudkomponenter . För det första är lösningstillförselsystem ( den rörliga fasen ) , som bär proverna genom kolonnen , viktigt, eftersom polariteten påverkar systemets förmåga att separera molekylerna. Kromatografikolonnen är vanligtvis en vertikal glaskolonn som är fylld med ett adsorberande medel . För det andra är den adsorberande (även känd som den stationära fasen , eftersom den inte rör sig ) som vanligen silikagel eller aluminiumoxid . För det tredje består provinföringssystemetav någon sorts injektionsport för att introducera prov som ska analyseras in i lösningstillförselsystem . Den fjärde komponenten är detektorn .

Detektorer

typ av detektor som används beror på vilken typ av prov de tekniker som används och vad molekyler de försöker isolera . Kriterierna teknikern använder när du väljer en detektor inkluderar selektivitet , signal - till - brus-förhållande , detektionsgräns , linjära området , tidskonstant , drift -och cellvolym . Vanligen använda detektorer innefattar ultraviolett - synlig detektorer , masspektrometrar , brytningsindex , fluorescensdetektorer eller evaporativ ljusspridande enheter .
Ordningen

Slå på detektorn , pumparna (som används för att lägga till tryck för att förflytta den mobila fasen genom den stationära fasen ) och den dator som kommer att spela in och skriva ut kromatogrammet. Välj lämpliga program för att samla in de önskade uppgifterna . Injicera provet i injektionsporten. Håll ett öga på trycket . Varje typ av kolumn har ett maximalt tryck; inte överstiger detta eller separation inte kommer att inträffa . Skriv ut kromatogrammet och analysera resultaten . Vid slutet av varje körning , är det viktigt att spola ut injektionsöppningen för att förhindra ackumulering , vilket kan skapa blockeringar.

Typer

Hydrofil interaktionskromatografi använder en bunden polärt stationär fas och en icke-polär , med vatten blandbart rörlig fas för att separera molekyler baserat på polaritet. Denna teknik har förmågan att separera sura, basiska och neutrala prover i en enda chromatogram.Normal faskromatografi använder en polär stationär fas och en icke-polär , icke-vattenhaltig mobil fas för att separera strukturella isomerer (molekyler som har samma molekylformel som har atomer bundna tillsammans i olika sätt ) . Omvänd fas-kromatografi är den mest använda typen av HPLC. Det använder sig av en icke-polär stationär fas och en vattenhaltig något polär rörlig fas. Denna metod används ofta av läkemedelsföretag för att kvalificera droger innan release.Size kromatografi separerar molekyler baserade på deras storlek och kan också bestämma strukturen av proteins.Ion byteskromatografi bygger på attraktion mellan jonerna i det upplösta ämnet och de laddade platser bundet på den stationära fasen. Addera Använder

HPLC är användbart i en mängd olika tillämpningar. Den kan användas för att analysera farmaceutiska material , vilket är till hjälp för att forska nya läkemedel samt rening befintliga. Det används också för att analysera biologiska vätskor , pesticider , sprängämnen och andra material. Även om det är en populär teknik för biomedicinsk , biokemisk och läkemedelsforskning , är det också används i kosmetika, livsmedel , miljö- och energiindustrin . Addera