Cell Lysis protokoll för proteinisolering

Små proteiner kan framställas syntetiskt , men av många skäl finns det ingen syntetisk maskiner bättre än själva cellen . Typiskt är det första steget i proteinisolering cellys . Cell Lysis
I cellys membranet runt cellen spricker.

Ordet " lys " kommer från ett grekiskt rot som betyder " att lossna . " I cellys , är de krafter som håller cellmembranet tillsammans störd, orsakar det att brista. Innehållet i cellen frigörs sedan in i den omgivande lösningen , inklusive proteinet av intresse . Oftast sker detta genom tillsats av en kemisk lösning som kallas lysbuffert . Addera Förberedelse Lysis Buffer
val av lysbuffert kommer att bero på celltypen , proteinet och tillämpning .

En myriad av olika lyseringslösningarär kommersiellt tillgängliga , eller gemensamma recept kan användas för framställning av lysbuffert från vanliga kemikalier . Den bästa buffert att använda kommer att variera beroende på celltypen som används , det protein som skall isoleras och den slutliga tillämpningen , men i allmänhet innehåller en lyslösning en detergent -molekyl (ofta NP- 40 eller Triton-X ), som upplöser cell membranet , tillsammans med buffertar, kelatorer och proteasinhibitorer för att förhindra proteinet från att skadas när frisatta från den skyddande miljön i cellen.

lysis Förhållanden
Performing lys enligt iskalla betingelser förhindrar skador på proteinet av intresse.

Lysbuffert används vanligen iskall och lyseringsprocessenfår fortgå under kalla förhållanden . Lösningen försiktigt vaggas för att uppmuntra jämn fördelning av celler och lyseringsprodukter . Efter ca 5 till 10 minuter , är lyslösning vanligtvis neutraliseras för att förhindra ytterligare aktivitet. Dessa försiktighetsåtgärder minska skador på proteinet och minska mängden främmande partiklar som produceras som senare måste avlägsnas . Addera Andra Lysis Metoder
Mekanisk kraft kan också användas för att lysera cellerna.

Även kemisk lys är den mildaste och mest använda , kan hårdare mekaniska metoder för att lysera celler användas i vissa fall . Dessa innefattar sonikering, upprepade frysnings -upptiningscykler och homogenisering , vilket är ett mäskprocessen . Konsultera den tekniska litteraturen för att hitta den lämpligaste metoden för ditt specifika fall . Addera