Hur man gör en begränsning Karta

I början av molekylärbiologi , forskare som vanligen restriktionskartläggning för att förstå de gener som de studerade . I moderna forskningslaboratorier , är restriktionskartläggning till stor del föråldrad eftersom sekvensering har blivit mer tillgänglig och mer ekonomisk än tidigare . Det finns dock fall där en restriktionskarta kan vara tillräckligt för en forskare att utföra sina undersökningar . Den övergripande strategin för restriktionskartläggning innebär användning av matsmältningsenzymer att bryta ner fysiskt ett prov av DNA . När du mäter produkterna av denna matsmältning , kan du " montera " bitarna och härleda den ursprungliga sekvensen av DNA . Detta är vad du behöver
begränsning enzymer
prov Dna- Buffertlösning
Is och varmt vattenbad
Gel elektrofores utrustning
Visa fler Instruktioner
DNA Digestion

1

Lägg ett restriktionsenzym till din DNA-prov . Använd EcoR1 , ett ofta använt enzym , till exempel.
2

Lägg denna blandning till en buffertlösning , som huvudsakligen är en plats för att reaktionen skall ske. Addera 3

Höj temperaturen för reaktionen , såsom anges i New England Biolabs manual . Varje restriktionsenzym har en specifik reaktionstemperatur vid vilken den fungerar bäst. Dessutom har varje enzym en specifik nukleotidsekvens som den är avsedd att rikta. EcoRI kommer att skanna och skär DNA vid nukleotidsekvensen CAATTC . Denna exakta ordningen av nukleotider måste finnas för enzymet att binda och klippa DNA . Fram till denna punkt , ska allt material förvaras på is för att förhindra oönskad aktivitet .
4

Efter att reaktionen att ske som anges i manualen , kör blandningen i en gelelektrofores maskin för att separera DNA fragment baserat på storlek . De minsta fragmenten flyttas längst över gelén .
5

Mät den sträcka som varje DNA-fragment . Dessa fem steg bör upprepas med flera olika enzymer för sig .
Konstruera Restriction Map
6

Med hjälp av data från gelen , samla in all information som du har hittat med användning av olika restriktionsenzymer .
7

Härled ordningen av restriktionsställen genom att jämföra de olika fragmentlängder som produceras av varje enzym . Till exempel, om enzym # 1 producerade två fragment av samma längd och enzym # 2 producerade tre fragment av samma längd , kan man dra slutsatsen att enzym # 1 skär halvvägs genom DNA och enzym # 2 skär DNA i tredjedelar .

8

Använda de slutsatser som dras i steg 2 , ihop ordningen på restriktionsställen för DNA. Addera