Protokoll för Hoechst Färgning

Hoechst fläckar är fluorescerande färgämnen som används för märkning av DNA och RNA genom fluorescensmikroskopi och flödescytometri tekniker . Hoechst 33258 och Hoechst 33342 är de mest använda av dessa fläckar . De har förmågan att binda till DNA-molekyler , vilket leder till kärnorna och mitokondrier att framträda som är fluorescerande i ultraviolett ljus. Protokoll för Hoechst färgning är vanligt i biotekniska och genetiskt laboratorium , och inkluderar cellfärgningstekniksom använder både Hoechst 33258 och Hoechst 33342 . Hoechst 33342 HSC färgning och Stamcells Purification protokoll

Detta protokoll används för att färga celler från möss benmärg . Tekniker förbereda benmärgsprov med HBSS + saltlösning , HEPES-buffert och fetalt kalvserum. De snurrar lösningen och tillsätt till en förvärmd DMEM-medium . Hoechst stain sätts sedan . Lösningen placeras i en 98,6 grader Fahrenheit vattenbad i exakt 90 minuter , rapporterar institutionen för immunologi vid University of Pittsburgh . DNA-segment visas fluorescerande i en flödescytometer .
Hoechst 33342 DNA Färgning

Under detta protokoll , tekniker suspenderade Hoechst 33.342 fläcken i destillerat vatten , tillsätt 2 procent fetalt kalvserumtill provcellen , att hålla pH vid 7,2 med hjälp av en buffertlösning . Cellerna inkuberas därefter vid 98,6 grader C i en timme , och genast analyseras med en utrustning som kallas flödescytometer .

Stained DNA syns då och fluorescerande , enligt University of Michigan Health System .


DNA upptäckt med hjälp av DNA - bindande Fluorokrom Hoechst 33258

Detta protokoll använde en utrustning som kallas spektrofotometer för att analysera DNA-och RNA -segment . Tekniker använder Hoechst 33258 arbetslösning och kalv bräss DNA-prover . De gör också en separerad lösning med hjälp av DNA-provet och en kemikalie som heter etidiumbromid . Senare De jämför cellfärgningsresultateni båda medierna , med hjälp av en spektrofotometer , enligt Current Protocols in Cytometry . Addera