TPA reningsprotokoll

Vävnadsplasminogenaktivator eller TPA är en typ av serin -proteas , som är protein kunde förstöra blodproppar. TPA finns i de celler som invändigt täcker blodkärlen . TPA -protokoll är en del av läkemedels -och medicinsk forskning om stroke , samt hjärt-och lungsjukdomar , såsom lungemboli och hjärtinfarkt . TPA rening hänför sig till isolering av detta protein från andra molekyler genom en serie processer , däribland kromatografi och elektrofores. Rening av TPA från Hog Njure

Detta protokoll används i studier av fibrinolys , processen för att bryta den produkt av koagulation som kallas fibrin , i samband med bildandet av tumörer . Tekniker extrahera TPA från acetontorkadhog kidney med kaliumacetat -buffert, vid pH 4,2 . Sedan lägger de ammoniumsulfat att inducera cell nederbörd . De lägger n- butyl - sepharos vid proverna, som sedan analyseras på ett chromatographer . Concanavalin A sätts också och chromatograph.y att separera olika proteiner utförs .
Rening av TPA från kinesisk hamster och E. coli- celler

Protein renhet är en viktig faktor för framgången för biologiska experiment . Renat TPA är också kommersiellt tillgängliga , vilket sparar tid och undvika risken att äventyra försöket på grund av dåligt renad lösning . Detta protokoll involverar reningsprocesser av TPA i däggdjurs -och bakterieceller . Tekniker fällning cellprover , filtrera dem och utför samhörighet och gelkromatografi analys . Senare , de analyserar och jämför resultaten , innan kommersiell produktion . Addera Redovisning av Active Human TPA i E. coli

klarade cellysater läggs till en lysin - Sepharose-kolonn , analyserades i en chromatographer och tvättades med en lösning av natrium- klor. Ett annat prov laddas på en andra kromatografikolonn innehållande proteiner som binder till TPA med en mycket hög affinitet. Ett prov från den andra kolonnen är blandad med en lösning av zink -Sepharose. Det resulterande proteinet visar mer än 90 procent renhet , enligt tidskriften " Applied and Environmental Microbiology . " Addera