Paraffininbäddning Protocol

Forskare behöver vanligtvis att stelna biologiska prover till avsnitt dem . Detta gör det lättare för forskare att lägga till färgämnen , antikroppar och prober för att det biologiska provet. Det minskar också överlagring av olika cellskikten . Forskare använder paraffin som en hård matris för styckning , eftersom paraffinet inte blandas med vatten . Paraffin är en typ av kolväte. De biologiska prover innehåller vatten , så att forskarna måste torka proverna använder allt mer koncentrerade etanol bad . Xylen

Forskare avlägsna etanolen med hjälp av xylen . Sedan använder smält paraffin för att avlägsna xylen . För ljusmikroskop , de paraffin är oftast fem um tjock . Paraffin är inte svårt nog för tunnare skivor . Forskare rehydrera vävnaden genom användning av xylen först, sedan etanol. Sedan skölj det biologiska provet med destillerat vatten för att undvika kontaminering. Addera Fixing

paraffininbäddade vävnader är vanligen fasta använder neutral buffrad formalin , som är den kommersiella versionen av formaldehyd. Detta inkluderar paraformaldehyd och metanol, vilket förhindrar att formaldehyd från omvandling till myrsyra. Tunt skivade vävnaden behöver 48 timmars fixering vid rumstemperatur för optimal histologi , som är studiet av mikroskopisk anatomi . Annars kommer vävnaden hårdna och bli spröda . Före bearbetningen vävnaden vanligtvis lagras i 70 procent etanol vid en temperatur på 4 grader Celsius.

Paraffinprocessorer

Forskare använder ofta paraffin processorer för att skicka vävnaden genom bad som gradvis torkar materialet innan varm paraffin kan komma in genom vävnaderna . Forskare kör processorn över natten . Processorn värmer endast vävnad efter en viss tid beroende på den vävnad som gör att det inte blir hårt och sprött . Processorn använder ett vakuum som påskyndar permeation av paraffin och tar bort luftbubblor. När bearbetas vävnaderna förvaras i kassetter vid rumstemperatur. Addera Vax Smält

paraffin smälter under en timme före tillsats av vävnaden. Hela kassetten placeras i en 65 grad Celsius paraffin badet under 15 minuter. En kall aluminium kylfläns kyler paraffin i 20 minuter . När vaxet sprickor eller vävnader som inte är korrekt inriktade , smälter vetenskapsmannen paraffinet och upprepar processen .
Skär

När sektione vävnaderna , får forskaren på vattenbadet på 35 till 37 grader Celsius. Vattnet är friskt och avjoniserat . Blocken placeras med framsidan nedåt på ett isblock eller kylfläns för 10 minuter. Ett blad skär blocket i sektioner. Två problem som kan uppstå är fattiga ribboning och fragmentering exemplar . När prover fragmentet , är vattnet för varmt . Oavsett om blocket inte menyfliksområdet väl , bör du lägga tillbaka på isblock och företaget upp vaxet innan du startar igen . Addera