Hur Stain agarosgeler

är viktigt vid utförande av agarosgelelektrofores Visualisering av nukleinsyra eller protein. Om du arbetar utan färgning av gelen , kommer du inte att kunna se där provet du testar har nått , och därför mätningar av molekylstorlek , till exempel, kommer att vara starkt begränsad . Fläckar på gelén genom att använda en gemensam , väl trialled färgämne såsom etidiumbromid ( EtBr ) som fluorescerar under ultraviolett ljus (UV) när intercalated i DNA- eller RNA-molekyler. Färgen kommer att hjälpa dig att utföra experimentet genom att visa upp molekylerna i ditt prov som mörkblå märken . Detta är vad du behöver
Skyddshandskar och skyddsglasögon
Agarosgel
Etidiumbromid
pipett ( Gilson för små mängder ) katalog Loading buffert
Visa fler Instruktioner

1

Använd skyddshandskar som är tunn men skyddande och låta dina fingrar och händer obegränsad rörelse . Använd en liten pipett för att dra några EtBr ( eller motsvarande fläck ) ur sin behållare .
2

Tillsätt 0,5 mikrogram per milliliter av din valda fläck på ditt prov . Täck provet och blanda manuellt . Flera shakes bör räcka. Addera 3

till en negativt laddad laddningsbuffert till blandningen med användning av en pipett. Detta möjliggör att färgade provet för att ses med blotta ögat , i naturligt ljus och eliminerar behovet av dyra, skadliga UV som annars skulle nedbryta molekylerna i vilket man är intresserad . Xylencyanol är ett vanligt använt laddningsbuffert , men andra är tillgängliga. Se till att du väljer en buffert som kommer att köra med samma hastighet som molekylen du mäter . Xylencyanol kör med samma hastighet som DNA-fragment som är 5000 baspar (bp) i längd .
4

Använd en ren pipett för att tillämpa din förbättrade prov till brunnarna i början av din agarosgel . Volymen du använder beror på storleken av gel kammar ( väl tjocklek och längd och gel tjocklek) . Färga ditt prov och inte kontroll så att du kan bestämma de parametrar som du är intresserad av ( t.ex. molekylvikt ) korrekt och effektivt .
5

Alternativt utför Southern blotting som ett sätt att visualisera ditt prov . Överföring av DNA till ett nitrocellulosamembran . Utsätta den för en hybridiseringssond . Detta är inte färgning , som sådan , men ger ett lämpligt alternativ , som beskrivs av tillgång Excellence . Addera