Hur man mäter Cellviabilitet

I de flesta biologiska experiment med cellkultur, inkluderar ett kritiskt steg veta vilka celler som är levande och som är döda i ditt prov . Dye utslagning är den mest populära metoden för mätning av cellviabilitet . Färgexklusion bygger på teorin att levande celler innehåller intakta membran och döda celler inte , alltså döda celler absorberar färgämnet i cytoplasman . Det finns olika färger och protokoll och de metoder som du väljer bör baseras på kostnad , känslighet , enkelhet och längden på förfarandet . Trypanblått är ett vanligt färgämne som används för att mäta celllivsduglighet, eftersom förfarandet kan utföras på fem till tio minuter och kostar endast den mängd av färgämnet reagens. Detta är vad du behöver
0,4 % trypanblått reagens
hemacytometer iPhonen täcker halka
Mikropipett
Pipettspetsar
fosfat saltlösning (PBS ) katalog Ljus mikroskop

Visa fler Instruktioner
1

Skaffa en pellet av cellerna du mäter .
2

Resuspendera cellpelleten i PBS för att få ungefär 5 x 105 celler /ml . PBS används eftersom mätningar viabilitet är noggrannare när cellerna är i en serumfri miljö; serumproteiner kan också fläckar och ger missvisande resultat . Addera 3

Lägg till lika delar av cellsuspension i PBS till lika delar av 0,4 % trypanblått att få en 1 till 2 utspädning ( t.ex. : . 100 ul av celler till 100 ul av trypanblått ) och blanda genom att pipettera upp och ned
4

Inkubera blandningen i mindre än tre minuter i rumstemperatur . Om celler räknas efter cirka fem minuter , kommer lönsamheten vara felaktiga på grund av celldöd .
5

Med locket glida redan på plats , fyller varje sida av en hemacytometer räknare med cellsuspensionen . Vanligtvis kommer varje sida att ta 10 till 20 ul .
6

Placera hemacytometer på scenen av ett ljusmikroskop och fokusera på cellerna .
7

Varje sida av den hemacytometer innehåller flera rutor . Räkna det totala antalet celler i en kvadraten av hemacytometer . Sedan räkna antalet icke livskraftiga ( blå ) och livskraftiga (töm) celler för sig , på samma torg .
8

Beräkna andelen livsdugliga celler på torget genom att dividera antalet livskraftiga celler av det totala antalet celler och multiplicera med 100 . Gör detta för flera rutor på hemacytometer att erhålla en genomsnittlig mätning livskraft . Addera