Varför lägger du röntgenfilmen ovanpå nylonmembranet i brickan?

I samband med molekylärbiologiska tekniker såsom Southern blotting eller Northern blotting, placeras röntgenfilmer vanligtvis inte ovanpå nylonmembran i brickorna. Istället överförs ofta nylonmembran som innehåller elektroforetiskt separerade nukleinsyror (DNA eller RNA) till fasta underlag, såsom Whatman-papper, följt av bakning eller UV-tvärbindning för att permanent immobilisera nukleinsyrorna på membranen.

Röntgenfilmer placeras bredvid eller i nära kontakt med dessa nylonmembran, vanligtvis inslagna separat i plastfolie, när autoradiografi utförs. Autoradiografi möjliggör detektering och visualisering av radioaktivt märkta nukleinsyror på membranen genom att placera röntgenfilmer bredvid dem i kassetter (inneslutna ljustäta bärare som håller filmen nära membranet).

När det radioaktiva materialet sönderfaller frigör det energi i form av fotoner eller elektroner, som interagerar med silverhalogenidkristallerna på röntgenfilmen. Detta leder till utvecklingen av mörka fläckar eller band på röntgenfilmen efter bearbetning, motsvarande positionerna för de radiomärkta nukleinsyrorna på membranet.

Därför placeras röntgenfilmen inte direkt ovanpå nylonmembranet utan används separat för att fånga strålningen som emitteras av de radioaktiva sonderna hybridiserade till nukleinsyrorna på membranet.